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Q78：分子生物学在真菌检验中的作用有多大？如何与现有G试验或GM试验结合进行病情判断？

2021-11-01作者：论坛报小璐资讯

呼吸原创

问：分子生物学在真菌检验中的作用有多大？如何与现有G试验或者GM试验结合进行病情判断？

指导专家：南京大学医学院附属金陵医院呼吸与危重症医学科施毅教授

目前，临床中真菌感染的诊断上相对比较困难。第一，真菌的培养条件是不同于普通细菌。如果医院的微生物室力量不强，只用细菌培养基培养真菌，培养结果通常不尽如人意。第二，真菌的识别更困难。细菌可以通过自动化仪器来识别菌种，但是真菌只能由检验科医生镜下识别。这很考验检验科医生的水平，既往调查显示，我国能识别念珠菌的检验科医生可以达到90%左右，能识别曲霉菌的检验科医生约50%左右，但是能识别毛霉菌的检验科医生只有5%。提高检验科医生识别真菌的水平也是提高真菌诊断的重要途径。

我们通过寻找标志物帮助我们识别真菌感染。现在有两个较好的生物标志物，即1-3-β葡聚糖（G）和半乳甘露聚糖抗原（GM）。G试验主要对念珠菌的敏感性较好，肺孢子菌及丝状真菌感染时也会升高，它的主要意义在于辨别患者是否有念珠菌血症。GM试验主要用于识别肺曲霉菌的感染，在中性粒细胞缺乏的患者中敏感性较好，在非中性粒细胞缺乏的患者中的敏感性差一些。如果怀疑非粒缺患者存在曲霉菌感染，肺泡灌洗液的GM试验结果更具有诊断价值。

分子生物学这些年的发展很快，它能识别的范围较广泛，但它也有缺点，尤其是宏基因组二代测序（mNGS）。为了测序病原体的DNA，需要对样本进行破壁。一份标本中，可能既存在真菌也存在细菌或者病毒。细菌的细胞壁和病毒的衣壳较薄，破“壁”容易；而真菌细胞壁较厚（例如曲霉菌或结核分枝杆菌）或有坚固荚膜（例如隐球菌），破壁困难。这要求做检测的破壁强度既不能过强也不能过弱，过强会导致细菌和病毒的核酸破损，过弱会导致真菌的核酸不易释放，可造成假阴性。技术限制了mNGS对真菌检测的敏感性。

我们要将真菌的培养和镜检、G试验、GM试验和分子生物学相结合，而不是用mNGS检测代替常规的真菌检测方法，发挥各自的优势形成互补，这样才能提高真菌病原学诊断的水平。

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