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肺炎链球菌的实验室检测方法主要有传统的病原学诊断包括涂片革兰染色和细菌培养,生化鉴定主要采用Optochin试验与胆汁溶菌试验。
抗原检测方法
(1)Binax NOW:是一种即时检测,可检测尿液和脑脊液样本中的肺炎链球菌细胞壁C多糖,但尿抗原检测不适合儿童肺炎链球菌性疾病(PD)的病原诊断。
(2)新型免疫荧光技术和自动分析是最近引入国内的免疫荧光试验,可自动读取检测尿液中的肺炎链球菌抗原。
抗体检查方法
使用微生物特异性抗原和免疫复合物测定方法,基于患者血清标本研究发现肺炎链球菌在呼吸道感染病原学中有一定地位。血清学方法对成人肺炎链球菌菌血症肺炎是敏感的。国内也有人用于儿童肺炎的回顾性诊断,但仍需进一步验证。
分子检测方法
(1)序贯多重PCR(sequential multiplex PCR,SMPCR):基于荚膜合成基因cps是否存在,将无荚膜肺炎链球菌(non-encapsulated pneumococci,NESp)进一步分为Ⅰ组或Ⅱ组。第Ⅰ组NESp具有cps基因,第Ⅱ组NNESp分离物具有新基因aliC、aliD和pspK。
(2)多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST):除用于细菌种内水平上对分离物进行分型的流行病学特征外,MLST还可用于准确鉴定肺炎链球菌。这是基于使用MLST的7个管家基因中的6个(ddl基因除外)的连锁序列产生的系统发育树,区分肺炎链球菌和VGS。
(3)全基因组测序(WGS):通过分析血清型、血清型变异、抗菌药物耐药谱、毒力决定因子等帮助准确鉴定生物体和候选疫苗。此外,通过鉴定新基因可以研发新的抗菌药物。PCR检测肺炎链球菌显示高特异性(99%),但与血培养相比,敏感性较低(47%),对肺炎链球菌进行血液 PCR检测的作用有限。分析原因可能与肺炎链球菌的细胞壁难以溶解有关;此外,人类DNA在血液样本中可能具有抑制肺炎链球菌的作用。
本文节选自《中国儿童肺炎链球菌性疾病诊断、治疗和预防专家共识》
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