首先，作者在急性肾小管坏死（ATN）患者肾活检组织中发现Miro1蛋白水平较微小病变肾病（MCD）对照组显著降低。相关性分析显示，Miro1表达水平与血清肌酐（r=-0.786，P<0.01）及血尿素氮（r=-0.600，P<0.05）呈负相关。在缺血再灌注（IR）及顺铂诱导的两种AKI小鼠模型中，肾皮质Miro1蛋白表达水平同样下调。免疫组织化学染色确认Miro1在肾小管上皮细胞中表达减少。上述结果表明，Miro1在AKI患者及动物模型肾组织中呈现一致性下调，其表达水平与肾功能损伤程度呈负相关。（图1）

之后作者在人肾近端小管上皮细胞系（HK-2）细胞中，通过小干扰RNA（siRNA）敲低Miro1表达，增加氯化钴（CoCl₂）或顺铂诱导的细胞凋亡率及cleaved caspase-3蛋白水平。敲低Miro1导致线粒体向核周区域聚集，线粒体分裂增加，融合蛋白L-OPA1、Mfn1、Mfn2表达下降。功能学检测显示，Miro1敲低增加线粒体活性氧产生，降低基础呼吸、最大呼吸及三磷酸腺苷（ATP）生成，减少线粒体DNA（mtDNA）拷贝数及Mic60、Sirt1、PGC-1α、Tom20蛋白表达。反之，Miro1过表达可抑制细胞凋亡，改善线粒体分布，抑制线粒体分裂，恢复线粒体功能。体外实验表明，Miro1在肾小管细胞中对维持线粒体稳态具有保护作用。（图2）

然后作者利用肾近端小管特异性Miro1条件性敲入（cKI）小鼠，经IR诱导AKI后，Miro1-cKI小鼠肾小管损伤评分、血清肌酐及尿素氮水平较对照组降低。TUNEL染色显示肾小管细胞凋亡减少，Western blot证实cleaved caspase-3表达下降。透射电镜观察显示线粒体嵴结构得以维持，肾组织ATP含量上调。在蛋白互作层面，谷胱甘肽S-转移酶（GST） pull-down及免疫共沉淀（co-IP）实验证实Miro1与Sirt6存在直接结合。免疫荧光显示CoCl₂处理后Sirt6部分由细胞核转位至细胞质并与Miro1共定位。在AKI模型中，Sirt6蛋白水平上调但其去乙酰化酶活性[以组蛋白H3赖氨酸9（H3K9）乙酰化水平为指标]下降。Sirt6敲低或药理学抑制可加剧CoCl₂诱导的Miro1下降及细胞凋亡，而Sirt6过表达或激活则产生保护效应，且该效应依赖其去乙酰化酶活性。（图3）

最后，作者使用sirtuin家族抑制剂烟酰胺（NAM）而非组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂曲古抑菌素A（TSA）处理可增加Miro1乙酰化，提示sirtuin家族参与Miro1去乙酰化调控。沉默信息调节因子6（Sirt6）过表达降低Miro1乙酰化水平，而去乙酰化酶活性突变体Sirt6H133Y无此效应。蛋白酶体抑制剂MG132而非自噬抑制剂CQ可延缓Miro1降解，表明Miro1经由泛素-蛋白酶体途径降解。Sirt6过表达降低Miro1泛素化水平并延长其半衰期，Sirt6抑制剂OSS可逆转此效应。之后通过K→R赖氨酸突变为精氨酸突变体筛选，确定K182为Sirt6去乙酰化Miro1的关键位点。同时Miro1过表达可减轻Sirt6敲低所加剧的线粒体损伤和细胞凋亡，而Sirt6抑制可削弱Miro1过表达对线粒体呼吸功能的改善作用。上述结果表明Miro1是Sirt6下游的关键效应分子，Sirt6通过去乙酰化K182位点抑制Miro1的泛素-蛋白酶体降解以维持其蛋白稳定性。（图4）